柯勒照明法常見問題解決方案

    當前配備顯微攝影裝置的顯微鏡，其照明設施與整個光路幾乎都是按照柯勒照明法的要求設計生產的，操作程序比較簡單也易于掌握，調整程序如下：
    1）首先將待檢切片置于載物臺，用4×或10×物鏡調準焦點，目的是確定載物臺的位置（此步很重要，必須先行，否則影響柯勒照明的正確調整；
    2）再將臺下聚光鏡的孔徑光闌與視場光闌收縮到zui小位置。如果聚光鏡設有附加錐光透鏡，應將此透鏡移入光路；
    3）用臺下聚光鏡的升降旋鈕，上下移動聚光鏡，使視場光闌的影像清晰地呈現在標本平面上；
    4）旋轉臺下聚光鏡上的兩個定心旋鈕，將視場光闌的影像調整到視野中心位置處—光學合軸；
    5）需要特別注意的是：在光學合軸之前，必須先進行顯微鏡機械軸的合軸調整，認真檢查物鏡、聚光鏡安裝定位是否正確；
    6）調整視場光闌和孔徑光闌到適當位置。
    用柯勒照明觀察標本時，在視野內見不到燈絲的影像，所以整個視野內亮度非常均勻，溫度也低不會損壞標本。而均勻的照明是顯微攝影時重要條件之一。缺點是視野內亮度較臨界照明弱一些。
    柯勒照明也有一些常見的問題，以下為解決方案：
    1）我們曾見到一些使用顯微鏡的部門，從未按柯勒照明法的要求照明系統，甚至在沒有光學合軸的情況下，就進行顯微攝影。結果因為視野內的亮度明顯不均勻，所拍攝的相片整個畫面的密度也深淺不一。應按上述步驟認真調整，這是顯微攝影必須掌握的基本操作技術。
    2）柯勒照明調整好后，聚光鏡的位置就應固定不動，不能隨意升降。有人采用將聚光鏡降低的方法，認為這樣可增加影像的景深和反差。這種操作方法是有害的，因為它首先破壞了柯勒照明，會使視野內照明不均勻。再者，他降低了數值孔徑的利用，必將降低物鏡的分辨能力。以此為代價來換取影像的所謂景深和反差，是極不可取的。
    3）影像清晰差時，應查找各方面因素，絕不能降低聚光鏡的方法解決：如：視場光闌與孔徑光闌是否過大，應按所用物鏡的要求進行調整；物鏡與載玻片、蓋玻片表面是否有污物，必須清潔干凈；切片不符合要求，過厚、染色過淡應重新制作符合顯微攝影標準的切片；物鏡的光行差校正程度差，顯微攝影應選用平像場復消色差物鏡等。
    4）聚光鏡升降鈕比較靠近調焦旋鈕，在調焦時經常誤將聚光鏡升降鈕旋轉，從而破壞了柯勒照明。因此特別強調，每次拍攝前都必須檢驗柯勒照明是否正確。檢驗方法很簡單，只需重復（2）（3）兩步操作即可。聚光鏡如已移位，應再次調整。
    5）為選擇拍攝部位和適當的放大倍率，需要經常轉動物鏡轉換器，換用不同倍率的物鏡。但經常發生物鏡轉換器轉換不到位的情況，機械軸被破壞，致使光學軸無法調整。這也是不正確使用顯微鏡的常見現象，必然影響成像質量。只要堅持每次拍攝前檢驗柯勒照明，就能立即發現物鏡不到位的差錯，要記住機械合軸是光學合軸的基礎。